在流式細胞術(shù)操作中,熒光標記的細胞通過足夠窄的的通道——能夠迫使細胞形成單一序列,逐個被光源照射,再通過對光信號的分析揭示有關(guān)單個細胞大小、DNA含量和其他參數(shù)的信息。
然而,該技術(shù)的一個問題是缺乏量化這些讀數(shù)變異程度的方法,或者無法了解給定儀器對相同細胞的重復(fù)測量可能返回的值范圍。
美國國家標準與技術(shù)研究院(NIST)的一個項目設(shè)計了一種流式細胞儀裝置,旨在幫助控制該技術(shù)中固有的一些讀數(shù)變異。
“流式細胞術(shù)是一項非常寶貴的技術(shù),但由于缺乏適當?shù)膶Σ淮_定性進行量化的方法,使得對單細胞測量的信心仍然有限。”該項目研究人員在其發(fā)表于Lab on a Chip的論文中評論道,“評估不同儀器設(shè)計或操作參數(shù),以改變測量重復(fù)性的方式影響測量的潛力,尤其具有挑戰(zhàn)性。”
NIST項目設(shè)計了一個流式細胞儀平臺,粒子流量高達每秒100個或更高,該平臺在通道中相隔16毫米的兩個不同位點,對粒子進行測量,每個位點測量2次,總共給出4個讀數(shù),從而允許測量變異程度低至1%水平。
該流式細胞儀芯片大約寬25毫米、長50毫米。兩個明亮的藍色區(qū)域是流體中的粒子被激光照射形成。兩個區(qū)域中每個點的熒光輸出信號由右側(cè)的光纖連接傳輸。
除了控制流體動力學(xué)以便精確知道粒子從一個節(jié)點到另一個節(jié)點的傳輸時間外,這種架構(gòu)還需要重新進行光學(xué)設(shè)計。
“其中一個挑戰(zhàn)是制造一個包含兩個相同區(qū)域的40 x 80微米的通道,用激光照射通過的粒子,并確保上游和下游方向進行檢測的一對檢測器可以捕獲最大量的發(fā)射熒光。”NIST評論道。
該項目開發(fā)了先進的波導(dǎo),可最大限度地減少損耗并防止發(fā)射光擴散,并研究使用不同的激光波長來揭示樣品的不同特性。
NIST的Matthew DiSalvo說:“我們對波導(dǎo)進行了廣泛的修改,通過結(jié)合微透鏡和其他改進來提高其靈敏度。我們認為很快就能提供不確定性測量,同時還能匹配價值數(shù)十萬美元的商用單一測量系統(tǒng)的靈敏度。”
在另一項研究中,NIST在對隱藏在角落周圍的物體進行成像的長期光學(xué)挑戰(zhàn)中又邁出了一步,這次使用的是亞毫米波長輻射。
非視距成像這一特定領(lǐng)域的現(xiàn)有研究包括使用深度神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)來解釋被遮擋物體返回的散斑圖案,并分析散射光中的光譜相關(guān)性以恢復(fù)被遮擋場景的高分辨率全息圖像。
NIST的新方法依賴于檢測更長亞毫米波長的信號,從300微米到1毫米。根據(jù)該項目,各種墻壁材料可以作為這些波長的部分反射鏡,反射而不是漫散射來自隱藏物體的輻射。
概念驗證試驗表明,這一原理可以在20分鐘內(nèi)對隱藏的場景進行成像,但更大的探測器陣列和信號放大磷化銦晶體管可以實現(xiàn)實時操作。
“這種方法最酷的地方在于它的簡單性。”NIST的Erich Grossman說,“沒有量子力學(xué),沒有相對論,沒有低溫或任何奇特的東西。只有晶體管和一臺基本的電腦和鏡子。”
審核編輯 :李倩
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原文標題:NIST流式細胞儀實現(xiàn)細胞精確量化分析
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