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      電子發(fā)燒友網(wǎng)>電子資料下載>醫(yī)療電子>GUIDE－seq和Digenome－seq等全基因組CRISPR 檢測(cè)的關(guān)鍵技術(shù)介紹

      GUIDE－seq和Digenome－seq等全基因組CRISPR 檢測(cè)的關(guān)鍵技術(shù)介紹

      2017-09-24 | rar | 0.17 MB | 次下載 | 免費(fèi)

      資料介紹

      　　在 2013 年，來(lái)自麻省總醫(yī)院的研究人員發(fā)現(xiàn)使用 CRISPR－Cas RNA 引導(dǎo)性核酸酶的一個(gè)重要局限：會(huì)在預(yù)期靶點(diǎn)以外的位點(diǎn)上生成多余的 DNA 突變。此后陸續(xù)有研究直接說(shuō)明了 CRISPR／Cas9 存在嚴(yán)重的脫靶性，即該技術(shù)可以發(fā)生非特異性切割，引起基因組非靶向位點(diǎn)的突變，這樣會(huì)造成研究結(jié)果的不確定性以及研究工作的大量增加，這一問(wèn)題嚴(yán)重地限制了 Cas9 的應(yīng)用。

      　　

      　　因此科學(xué)家們希望能通過(guò)全基因組檢測(cè)脫靶剪切，近年來(lái)研發(fā)了不少檢測(cè)脫靶剪切酶活性的實(shí)驗(yàn)方法，比如近期 Nature Methods 報(bào)道的兩項(xiàng)技術(shù)，這些技術(shù)是什么，具有何種優(yōu)勢(shì)，具體讓我們來(lái)看看：

      　　GUIDE－seq 以往人們?cè)跈z測(cè) CRISPR－Cas 核酸酶誘導(dǎo)的脫靶 DNA 斷裂時(shí)，往往事先假定脫靶位點(diǎn)與靶標(biāo)位點(diǎn)相似。GUIDE－seq 是首個(gè)不需要這樣做的方法，而且它相當(dāng)靈敏 。一組研究人員利用一種短雙鏈寡核苷酸來(lái)標(biāo)記 CRISPR－Cas 誘導(dǎo)的脫靶斷裂，測(cè)序這些標(biāo)簽所在的基因組區(qū)域，就能夠確定脫靶突變的位置。研究表明，就算某個(gè)脫靶突變的出現(xiàn)頻率低至 0．1％，GUIDE－seq 也能夠檢測(cè)得到。由于許多脫靶突變發(fā)生在與目標(biāo)位點(diǎn)差異很大的地方，因此脫靶 DSB 的數(shù)量和位置是很難預(yù)測(cè)的。

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