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一種具有高度異質(zhì)性、高靈敏度-單分子分辨率傳感器的開發(fā)利用

傳感器專家網(wǎng) ? 來源:石墨烯聯(lián)盟 ? 作者:石墨烯聯(lián)盟 ? 2025-02-06 18:13 ? 次閱讀

用于連續(xù)監(jiān)測生物分子濃度的傳感器對于在病人護理、工業(yè)流程以及環(huán)境安全和可持續(xù)性方面開發(fā)基于生化的監(jiān)測和控制策略是必需的。傳統(tǒng)的生物傳感器具有宏觀的感測區(qū)域,例如電極或光學探測的表面積,收集的信號源自大量分子集合的相互作用,而無法解析單分子層面的相互作用。近年來,傳感器已經(jīng)被微型化,并且開發(fā)出了由微型傳感器陣列組成的傳感器,其中每個單獨的傳感器都足夠小,能夠解析由單分子相互作用引起的轉(zhuǎn)變。本文用于研究由單分子分辨率傳感器陣列組成的連續(xù)傳感器中的功能異質(zhì)性,通過將傳感器暴露于分析物濃度變化(增加和減少)超過長時間跨度(25小時)。 4db24738-c439-11ef-902f-92fbcf53809c.gif4dcf79ac-c439-11ef-902f-92fbcf53809c.gif 該方法是一種基于數(shù)千個生物功能化粒子與生物功能化感測表面相互作用的連續(xù)生物傳感技術(shù)。揭示了異質(zhì)性是由粒子和表面上親和力分子數(shù)量的隨機波動引起的,并且響應(yīng)特性的逐漸變化與單粒子傳感器中分子的逐漸損失有關(guān)。結(jié)果表明了顯著的分子和時間異質(zhì)性,并提供了如何為單分子分辨率的連續(xù)親和力基礎(chǔ)生物分子監(jiān)測設(shè)計、精確和穩(wěn)定的傳感器的思路。 4db24738-c439-11ef-902f-92fbcf53809c.gif

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4e0d3742-c439-11ef-902f-92fbcf53809c.gif 近日,來自荷蘭埃因霍溫理工大學復(fù)雜分子系統(tǒng)研究所(ICMS)W. J. Prins團隊,在《Advanced Science》雜志發(fā)表了題為“How Highly Heterogeneous Sensors with Single-Molecule Resolution can Result in Robust Continuous Monitoring Over Long Time Spans”的文章。該研究對具有單分子分辨率的生物分子傳感器由大量傳感器組成,這些傳感器測量與單分子結(jié)合和解離事件相關(guān)的態(tài)變化。傳統(tǒng)上,為了獲得足夠的統(tǒng)計數(shù)據(jù),會從許多單獨的傳感器中聚合信號。然而,通過聚合信號,傳感器之間的差異會丟失,異質(zhì)性也無法被研究。在這里,我們研究了長時間跨度內(nèi)具有單分子分辨率的傳感器,這使得可以從獨立的傳感器中收集足夠的統(tǒng)計數(shù)據(jù)。這允許比較傳感器,揭示了它們分子組裝中與隨機變化相關(guān)的基本異質(zhì)性。該研究是通過粒子運動生物傳感進行的,這是一種與數(shù)千個粒子動態(tài)與感測表面相互作用的傳感方法。在25小時內(nèi),對分析物濃度的一系列調(diào)制中,研究了單個粒子的信號。這些結(jié)果提供了對具有單分子分辨率的連續(xù)傳感器的分子和時間異質(zhì)性的見解,并解釋了如何設(shè)計傳感器以實現(xiàn)穩(wěn)健、精確和穩(wěn)定的生物分子監(jiān)測。 4e1cde90-c439-11ef-902f-92fbcf53809c.gif4e0d3742-c439-11ef-902f-92fbcf53809c.gif 本文主要關(guān)注了如何在基本的單分子層面上研究、理解和利用基于親和力的傳感器的功能特性。將為實現(xiàn)能夠長時間跨度內(nèi)精確和穩(wěn)定監(jiān)測生物分子的傳感器的工程策略和設(shè)計奠定基礎(chǔ),以滿足廣泛的應(yīng)用需求。 4e1cde90-c439-11ef-902f-92fbcf53809c.gif4e90780a-c439-11ef-902f-92fbcf53809c.png

圖1基于親和力的生物分子結(jié)合轉(zhuǎn)化為測量信號的傳感過程

4e0d3742-c439-11ef-902f-92fbcf53809c.gif 傳感器分為三類:i) 基于集合的傳感器,ii) 具有單分子分辨率的傳感器組合,以及 iii) 具有單分子分辨率的單個傳感器探測。具有單分子分辨率的轉(zhuǎn)導(dǎo)方法能夠區(qū)分和計數(shù)單個單分子結(jié)合和解離事件。劑量-反應(yīng)關(guān)系通常通過聚合單分子數(shù)據(jù)和許多單獨傳感器組合信號來建立。組合增加了測量數(shù)據(jù)的統(tǒng)計量,然而,平均過程會導(dǎo)致關(guān)于異質(zhì)性的信息丟失,例如分子之間的差異、分子相互作用之間的差異以及傳感器之間的差異。 4e1cde90-c439-11ef-902f-92fbcf53809c.gif4e0d3742-c439-11ef-902f-92fbcf53809c.gif 作者深入研究了具有單分子分辨率的傳感器之間的差異,以研究變異性并理解高度異質(zhì)性傳感器如何能夠在長時間跨度內(nèi)實現(xiàn)穩(wěn)健的連續(xù)監(jiān)測。BPM被用作模型系統(tǒng)(圖1B)。BPM是一種利用生物功能化的微米級粒子作為具有單分子分辨率的傳感器的生物傳感方法。粒子的運動特性受到粒子和感測表面之間可逆親和力單分子相互作用的影響。在實驗中,粒子通過柔性的雙鏈DNA系繩附著在基質(zhì)上,將每個微米級粒子限制在傳感器表面上的亞微米級區(qū)域。使用寬場光學顯微鏡實時測量每個粒子的運動軌跡。 4e1cde90-c439-11ef-902f-92fbcf53809c.gif4f30d5ac-c439-11ef-902f-92fbcf53809c.png ? 圖2在BPM傳感器中探測單個粒子,以獲得25小時內(nèi)的單粒子響應(yīng) 4e0d3742-c439-11ef-902f-92fbcf53809c.gif 本研究中使用的實驗設(shè)置將粒子被固定在流動池內(nèi)的表面上,該流動池連接到一個定制的流體系統(tǒng),用于長時間跨度的自動化流體交換。作者使用了一個基于競爭的BPM傳感器進行測量,該傳感器旨在連續(xù)監(jiān)測小分子(糖苷生物堿)。粒子與分析物類似分子的結(jié)合導(dǎo)致粒子的運動自由度減少,即粒子從未結(jié)合狀態(tài)轉(zhuǎn)換為結(jié)合狀態(tài)。粒子的視頻圖像被實時處理,以定位每個粒子的x和y位置作為時間的函數(shù)。然后分析運動軌跡以確定切換事件和粒子的相應(yīng)時間依賴狀態(tài)。10個分析物濃度-時間曲線系列在25小時內(nèi)順序應(yīng)用于單個流動池,每個系列由8個不同分析物濃度的流體應(yīng)用組成。在每次流體應(yīng)用后跟蹤粒子15分鐘(圖2B)。在高分析物濃度下,活動低,因為粒子主要處于未結(jié)合狀態(tài),因為抗體被分析物分子占據(jù),很少與感測表面上的分析物類似物結(jié)合。黑色曲線顯示了粒子集合的平均響應(yīng),與溶液中分析物濃度呈負相關(guān),這符合基于競爭的傳感器的預(yù)期(圖2B)。有趣的是,單個粒子的響應(yīng)(紅色)顯示出高度的變化:不同的粒子顯示出明顯不同的行為。這些差異可能由時間和非時間異質(zhì)性引起。時間異質(zhì)性與單個粒子在結(jié)合和未結(jié)合狀態(tài)之間轉(zhuǎn)換的時間點的隨機性有關(guān)。三個選定粒子的DRCs,分別為它們的第一個濃度系列(左)和所有十個濃度系列的時間平均(右)。根據(jù)粒子集合的平均響應(yīng),一些粒子確實顯示出S形曲線,但令人驚訝的是,粒子也顯示出鐘形曲線(圖2C)。 4e1cde90-c439-11ef-902f-92fbcf53809c.gif4f8b9ad2-c439-11ef-902f-92fbcf53809c.png

圖3對具有不同數(shù)量的粒子端結(jié)合分子(NPSB)和基質(zhì)端結(jié)合分子 4e0d3742-c439-11ef-902f-92fbcf53809c.gif 一個競爭性的基于粒子的傳感器被建模為具有NPSB(粒子端結(jié)合分子,PSBs)與溶液中的分析物分子以及感測表面上的NSSB(基質(zhì)端結(jié)合分子,SSBs)相互作用。顯示了不同數(shù)量的粒子結(jié)合分子和恒定數(shù)量的基質(zhì)結(jié)合分子(NSSB = 10)的模擬時間軌跡示例(圖3B)。突出顯示了兩個時間依賴的粒子屬性:PSBs和SSBs之間形成的鍵的數(shù)量(左y軸,紅色曲線)和觀察到的粒子狀態(tài)(右y軸,灰色曲線)。當沒有PSB-SSB鍵時,粒子狀態(tài)為未結(jié)合,當至少有一個PSB-SSB鍵時,粒子狀態(tài)為結(jié)合。圖3C顯示了單鍵時間分數(shù),即在只有一個PSB-SSB鍵時,粒子在單鍵狀態(tài)下花費的平均時間分數(shù)。對于少量的粒子端結(jié)合分子,隨著基質(zhì)端結(jié)合分子數(shù)量的增加,單鍵時間分數(shù)增加。然而,對于大量的粒子端結(jié)合分子,由于形成了多個鍵,該分數(shù)減少。圖3D顯示了對劑量-反應(yīng)關(guān)系的影響,粒子切換活動繪制在y軸上。對于少量的結(jié)合分子,DRC呈現(xiàn)S形,并且隨著結(jié)合分子數(shù)量的增加,曲線向右移動。 4e1cde90-c439-11ef-902f-92fbcf53809c.gif

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圖4利用信號-時間曲線的相位對單粒子響應(yīng)特性進行分類

4e0d3742-c439-11ef-902f-92fbcf53809c.gif 不同顏色表示不同的區(qū)間,在4A和4B兩個面板中均有顯示(圖4A,4B )。數(shù)據(jù)顯示不同的相移區(qū)間與不同的DRC特征相關(guān),從無響應(yīng)(暗紅色)到S形(橙色)到鐘形(綠色)。作者在本研究中,開發(fā)的分類方法可以研究粒子如何在長時間跨度內(nèi)改變它們的DRC特征。結(jié)果也顯示了粒子在25小時內(nèi)如何改變它們的DRC特征(圖4C,4D)。頂部面板與最初(在t = 0時)在面板A和B的橙色區(qū)間內(nèi)的粒子有關(guān),在所有面板中,紅色曲線表示第一個DRC(在0到2.5小時之間測量),藍色曲線表示最后一個DRC(在22.5到25小時之間測量)。頂部面板的結(jié)果表明,最初具有S形DRC的粒子在25小時內(nèi)保持相同的DRC形狀和相同的相位偏移,而信號的幅度隨時間減少。底部面板顯示,最初具有鐘形DRC的粒子將其特征轉(zhuǎn)變?yōu)镾形DRC(具有較低的相位偏移)。具有鐘形DRC的粒子具有大量的結(jié)合分子和多價相互作用,因此失去結(jié)合分子將增加具有單價鍵的可能性,因此將DRC向S形特征轉(zhuǎn)移。 4e1cde90-c439-11ef-902f-92fbcf53809c.gif4e0d3742-c439-11ef-902f-92fbcf53809c.gif 在粒子與表面之間的結(jié)合主要由單價鍵主導(dǎo)的區(qū)域中進行的測量和模擬可以用來估計傳感器中結(jié)合分子的損失率。在單價結(jié)合區(qū)域,粒子具有S形DRCs,觀察到的活動速度逐漸以每小時約1.6 ± 0.2%的速率減少(圖4C)。 4e1cde90-c439-11ef-902f-92fbcf53809c.gif4e0d3742-c439-11ef-902f-92fbcf53809c.gif 文章鏈接:https://doi.org/10.1002/advs.202412181 ? ? ? 審核編輯 黃宇

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