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Prominence nano 納升液相色譜儀

領拓儀器 ? 來源:領拓儀器 ? 2020-04-26 11:20 ? 次閱讀

Prominence nano 納升液相色譜儀
Prominence nano系列是一套納升LC系統,可在納升流量下進行精準流速的溶劑輸送。按照應用不同,可以配置成1D和2D系統。
Prominence nano具備納升流速下的高保留時間重復性,非常低的系統死體積和極低的交叉污染等特點。

Nano-Assist一維LC設置圖

應用

高保留時間重復性

蛋白質組分析需要比較不同樣本的色譜峰差異,而樣本中又存在許多特征相似的多肽,對保留時間的重復性要求非常高。Prominence nano系統的高重復性可保證蛋白質組分析的高精數據,配置了RFC系統的LC-20AD nano可以在流速為300 nL/min獲得RSD不超過0.2% 的保留時間重復性。


牛血清白蛋白(BSA)酶解樣品的重復性

2維 LC的高分辨率


牛血清白蛋白(BSA)酶解樣品的重復性

在蛋白質組學分析時,單一的1D反相分離不足以提供足夠的色譜峰容量;所以,為了實現復雜樣品的分離,需要進行2D分離以保證足夠的峰容量。Prominence nano系統可以進行2D分析,結合陽離子交換和反相模式,為蛋白質組學分析提供所需的核心技術。下圖為200fmol酵母蛋白質的分析圖,1D分離中的未分離組分在2D中繼續分離成幾個組分,2D分離的峰容量大大大于1D所獲得的效果。

分析條件

1維

PolysulfoethylA (50mmL.×1mmI.D.)
流動相 甲酸銨緩沖液
濃度STEP梯度
流速 40 nL/min
捕集柱 (5 mmL.×300 ?m I.D.)
L-column (micro)
捕集時長 5分鐘
脫鹽溶劑 水/蟻酸=100/0.1
脫鹽流速 L/min
脫鹽時長 5分鐘

2維

PicoFrit (100 mmL.×75 ?m I.D.)
流動相 梯度洗脫
A)水/乙腈/蟻酸=98/2/0.1(v/v) B) 水/乙腈/蟻酸=5/95/0.1(v/v)
流速 600nL/min
溫度 溫度
檢測 LCMS-IT-TOF
樣本 酵母蛋白中的蛋白
(相當于200 fmol的)

分別利用1維和2維中不同類型的柱體進行其他組合的分離模式也是可行的。在這種情況下,分離或檢測方法由于使用的移動相分離模式或類型之間的相互作用,可能會有一些限制。

連接MALDI-TOFMS使用

Prominence nano系統不僅僅可以通過nano ESI接口連接LCMS使用,還可連接到配有自動點靶儀的MALDI-TOFMS儀器。為了準確分析MALDI靶的每個色譜峰,需要LC能夠在1nL到1μL范圍之內精確控制流速,Prominence nano系統的完全滿足了此需要。


酶解BSA樣品的UV色譜圖(500fmol)

分析條件

檢測器 UV220 nm
MonoCap for Fast-flow 快速MonoCap
(250 mmL. × 100 μm I.D.)
流動相 1、水/乙腈/蟻酸=98/2/0.1(v/v) B) 水/乙腈/蟻酸=5/95/0.1(v/v)
2、梯度洗脫
流速 1 μL/min
溫度 環境溫度
捕捉柱 ODS (1 mmL. × 0.5 mm I.D.)
點靶間隔 12 秒的點斷
每點液體:200nL(不包括基質)
lw
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